课程名称：兽药残留分析课程实验 

英文名称：Analytical Techniques of Veterinary Drug Residues Experiment

课程总学时：48                    实验学时：32

课程总学分：3

适用专业：动物医学

一、课程性质与任务(100～300字)

《兽药残留分析》是兽医学院人才培养方案中专业课程之一。课程实验内容包括动物样品（或动物源食品样品）的采集与处理，HPLC、LC-MS等大型精密分析仪器在残留分析中的应用操作，免疫分析技术在残留分析中的应用操作；我国现行动物源食品兽药或有害物质检测标准的解析与实际操作。

二、教学目的与要求(600字以内)

通过课程实验环节，使学生掌握HPLC、LC-MS等精密分析仪器在动物样品分析中的实际操作，掌握免疫分析技术（胶体金、ELISA等技术）及不同制品的应用操作，掌握动物样品、食品样品的采集与预处理原理和操作实践。掌握我国现行的动物源食品残留检测标准的具体操作。

三、实验项目设置

（一）实验一：体内药物分析的基本操作技术（动物样品采集）

1、实验类型：演示型、实践教学。

2、实验学时数：6

3、实验目的

（1）掌握生物样品的种类、采集、制备、保存。

（2）掌握样品的前处理方法。

4、实验内容

（1）实验动物（猪）的保定。

（2）全血、血浆、血清样品的采集、制备、保存。

5、实验要求

（1）认真观察记录操作过程

（2）报告时间：实验后1周上交实验报告

（3）思考、讨论内容：基本操作过程中应注意的问题。观察并记录不同种类血样的外观、颜色。抗凝剂的使用对研究工作的影响。

6、实验仪器设备

实验动物。离心机、摇床、旋转蒸发仪、氮吹仪等。

（二）实验二：体内药物分析的基本操作技术（动物样品前处理技术）

1、实验类型：演示型、实践教学

2、实验学时数：6

3、实验目的

（1）掌握血浆样品的前处理方法。

（2）了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义。

（3）比较不同蛋白沉淀剂的沉淀效率。

4、实验内容

（1）分别采用4种不同类型的试剂（与水相混溶的有机溶剂、中性盐、强酸和重金属盐类）沉淀、除去血浆样品中的蛋白质。

（2）操作中注意观察不同类型的试剂沉淀蛋白质的效果，并采用高效液相色谱法对实验结果进行分析。

5、实验要求

（1）认真观察记录操作过程。

（2）报告时间：实验后1周上交实验报告。

（3）思考、讨论内容：基本操作过程中应注意的问题；不同蛋白质沉淀剂的沉淀效果、优缺点、对样品进一步处理的影响。

6、实验仪器设备

高速离心机、摇床、旋转蒸发仪、氮吹仪等。

（三）实验三：动物组织中氟喹诺酮类药物多残留分析

1、实验类型：综合性、验证型

2、实验学时数：6 

3、实验目的

（1）了解高效液相色谱的工作原理。

（2）掌握动物组织中氟喹诺酮类药物的提取和检测方法。

4、实验内容

（1）样品中药物的提取、净化。

（2）HPLC工作原理、仪器工作站了解、操作演示。

（3）高效液相色谱—荧光法同时分析组织样品中诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星的含量。

5、实验要求

（1）认真观察记录操作过程，规范仪器操作规程。

（2）报告时间：实验后1周上交实验报告。

（3）讨论内容：影响氟喹诺酮类药物回收率的因素、标准曲线的绘制与药物浓度定量

6、实验仪器设备

固相萃取装置、旋转蒸发仪、氮吹仪、高效液相色谱仪。

（四）实验四：生物样品中克伦特罗等β-受体激动剂类的免疫分析法

1、实验类型：综合性、验证型

2、实验学时数：6

3、实验目的

（1）了解免疫分析法检测生物药物浓度的工作原理、特性。

（2）掌握生物样品中克伦特罗等β-受体激动剂类的免疫分析方法。

4、实验内容

（1）样品中药物的提取、净化。

（2）免疫分析方法操作。

（3）结果观察、比较，对免疫分析方法特性的了解，与仪器分析方法的比较。

5、实验要求

（1）认真观察记录操作过程。

（2）报告时间：实验后1周上交实验报告。

（3）讨论内容：影响免疫分析结果的因素

6、实验仪器设备

酶标仪、克伦特罗检测试剂盒（或胶体金试纸条、检测板）、高效液相色谱仪等。

（五）实验五：生物样品中三聚氰胺快速检测——液相色谱法

1、实验类型：设计性实验与考核实验

2、实验学时数：8

3、实验目的

（1）了解三聚氰胺的理化性质、用途，掌握生物样品中三聚氰胺的提取和检测方法。

（2）掌握质控样品的制备，掌握标准曲线的设计方法与实验建立。

（3）掌握相对回收率、相对误差等分析方法验证参数的测定方法。

4、实验内容

（1）动物样品的前处理制备。

（2）质控样品的制备、处理。

（3）样品中三聚氰胺的提取、净化。

（4）色谱工作条件的建立。

（5）标准曲线绘制、样品中药物浓度的定量。

5、实验要求

（1）预习要求：查阅相关资料，根据药物结构分析样品前处理和测定的原理。

（2）实验设计要求：根据所用试药、试液，设计标准溶液配制方法、标准曲线浓度范围、标准曲线各浓度点的；根据最高残留限量、仪器分析方法特点、药、试液和样品基准特点，设计分析方法的定量限和检测限。

（3）实验操作要求：玻璃仪器的正确使用；量器具的正确使用；分析数据的正确处理。

（4）实验报告要求：实验报告书写规范；原始记录真实、准确；测定数据正确处理；测定结果与实际相符，并在规定的误差范围内。

（5）应在规定的时间内完成实验内容。

6、实验仪器设备

固相萃取装置、旋转蒸发仪、氮吹仪、高效液相色谱仪。

四、考核方式与方法

实验报告、实际操作。设计性实验：实验设计步骤、数据、报告情况。

五、实验指导教材与参考资料

1. 实验教材：自编

2．参考资料

（1）吴永宁等.《兽药残留检测与监控技术》.北京：2002

（2）李好枝主编.《体内药物分析》（第二版），.北京：中国医药科技出版社，2011，国家级规划教材

（3）中华人民共和国农业部公告：兽药残留检测标准（现行）

（4）国际食品法典委员会（CAC）公告、《食品中兽药残留最大限量和风险管理建议》

（撰写人：陈红       审核人：      ）